(2013•江苏一模)构建基因文库是获取目的基因的方法之一.图甲表示cDNA(互补DNA)文库构建过程,其中①~③表示有

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  • 解题思路:PCR技术的相关知识:

    1、概念:PCR全称为聚合酶链式反应,是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术.

    2、原理:DNA复制.

    3、前提条件:要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物.

    4、过程:①高温变性:DNA解旋过程;②低温复性:引物结合到互补链DNA上;③中温延伸:合成子链.PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开.

    (1)PCR扩增DNA时要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物,引物不能过短,否则没有一定的特异性,容易导致配对错误.

    (2)图甲中②过程是以mRNA为模板合成DNA链过程,该过程需要逆转录酶,过程③是以DNA一条链为模板合成双链DNA过程,需要DNA聚合酶.两个过程都是合成DNA链,所以需要四种脱氧核苷酸作原料.

    (3)由图可知,在cDNA和质粒DNA上加上一段寡聚核苷酸的目的是形成黏性末端,由于加上的核苷酸种类相同,所以不存在自身环化或同种DNA两两结合的现象,只能形成1种重组DNA分子.

    (4)由PstⅠ酶切结果可知,质粒的长度为4.36kb,PstⅠ和EcoRⅠ切割形成3.61kb和0.75kb,PstⅠ和SalⅠ切割形成3.23kb和1.13kb,所以PstⅠ与EcoRⅠ的距离为0.75kb,EcoRⅠ与SalⅠ的距离为0.38kb,SalⅠ和PstⅠ的距离为3.61kb.

    故答案为:

    (1)没有一定的特异性,容易导致错配(或影响退火温度)

    (2)逆转录酶DNA聚合酶游离的脱氧核苷酸

    (3)黏性末端1(或2)同一种DNA的两端的尾巴是相同的,不存在自身环化或同种DNA两两结合的现象

    (4)如下图

    点评:

    本题考点: 基因工程的原理及技术.

    考点点评: 本题考查基因工程,意在考查考生能从课外材料中获取相关的生物学信息,并能运用这些信息,结合所学知识解决相关的生物学问题.