一般不应该是质粒的问题,如果你担心是反复冻融的问题,建议分装或是在4摄氏度解冻.
最容易出问题的应该是转染试剂和细胞状态.
不知道你用的什么转染试剂,PEI因为带正电荷,通常来说比较容易进细胞,但是毒性较大.通用的转染试剂是Lipofectamin2000,但是针对不同的细胞,转染试剂也不一样.
至于细胞,看贴壁还是悬浮,通常说来,贴壁容易转.如果是悬浮的,建议你离心后再转染.
质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗?
一般不应该是质粒的问题,如果你担心是反复冻融的问题,建议分装或是在4摄氏度解冻.
最容易出问题的应该是转染试剂和细胞状态.
不知道你用的什么转染试剂,PEI因为带正电荷,通常来说比较容易进细胞,但是毒性较大.通用的转染试剂是Lipofectamin2000,但是针对不同的细胞,转染试剂也不一样.
至于细胞,看贴壁还是悬浮,通常说来,贴壁容易转.如果是悬浮的,建议你离心后再转染.