基因敲除,怎么做最简单?

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  • 通过同源重组使特定靶基因失活,以研究该基因的功能,称为基因敲除(gene knock-out)

    基因敲除的技术路线如下:

    (1)构建重组基因载体﹔

    (2)用电穿孔等方法把重组DNA转入受体细胞内﹔

    (3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔

    (4)分子生物学检测.

    据俺所知目前有RecA重组系统、Red重组系统

    1、RecA重组系统由RecA和RecBCD组成,必须以环形的质粒状态存在.

    2、Red同源重组系统由λ噬菌体exo、bet、gam三个基因组成,线性载体即可.目前用这种方法敲除大肠杆菌的已经非常成熟了.

    也有很多人用基因沉默来研究细菌(例如antisense RNA)