通过同源重组使特定靶基因失活,以研究该基因的功能,称为基因敲除(gene knock-out)
基因敲除的技术路线如下:
(1)构建重组基因载体﹔
(2)用电穿孔等方法把重组DNA转入受体细胞内﹔
(3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔
(4)分子生物学检测.
据俺所知目前有RecA重组系统、Red重组系统
1、RecA重组系统由RecA和RecBCD组成,必须以环形的质粒状态存在.
2、Red同源重组系统由λ噬菌体exo、bet、gam三个基因组成,线性载体即可.目前用这种方法敲除大肠杆菌的已经非常成熟了.
也有很多人用基因沉默来研究细菌(例如antisense RNA)