提RNA的时候有可能混了基因组DNA.
这样的话,PCR的时候,假如这个基因根本没表达,结果因为混了DNA进去,PCR就可以P出结果.但是这个条带不是从RNA来的.这就是DNA污染,它会干扰PCR的结果.
可以在提取RNA后,用DNA酶处理,这样分解可能混入的DNA来避免.也可以通过合理设计引物来避免,即使有DNA混入,这样设计的引物也只扩增RNA,而不扩增DNA.
这就要求引物得最好设计成跨外显子接头.因为DNA上的基因外显子和内含子是隔开的,而RNA上内含子被切掉了,是外显子链接在一起.剩下的,自己想去吧,已经快接近结果了……