解题思路：检测土壤中细菌总数，应该进行计数，根据选项，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数．
A、首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A正确；
B、然后进行对土壤稀释液进行涂布于各组平板上，B正确；
C、将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，C正确；
D、确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，D错误．
故选：D．
点评：
本题考点： 测定某种微生物的数量；微生物的分离和培养．
考点点评： 本题属于识记内容，理解、识记稀释涂布平板法，就可以做出正确的答案．