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最佳答案:DNA合成,新链的延伸方向是5→3因此,需要在5端加上酶切位点记得再加上一些保护碱基,因为内切酶除了有特异的识别位点之外,还需多几个无需特异性的碱基提供一个pl
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最佳答案:这个基于你的片段中的酶切位点,如果你的片段中含有和载体中位点一致的序列,那你就不能取这个位点,因为酶切时会把你的片段切开,可以选你的片段中没有的位点,设计引物
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最佳答案:我觉得不用吧 计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是
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最佳答案:带酶切位点的引物是算在长度内的,计算Tm值和GC含量都应将酶切位点包括在内
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最佳答案:首先要看目的基因中是否含有该酶切位点,只有没有的才可以选.其次,如果需要做表达,需要考虑起始密码子,防止移码突变;第三要考虑标签用于后面的蛋白纯化.如果仅仅用来
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最佳答案:如果是公司刚买来的是没有的,pMD18-T由pUC18载体改建而成,在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点
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最佳答案:EK位点是肠激酶的切割位点,蛋白表达纯化完后可以用肠激酶将N端的标签切掉(像His tag,S tag).如果你觉得没必要切去标签的话,设计引物时完全可以将这个
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最佳答案:不是随意添加.酶切位点都加在引物的5‘端.这样在第一轮扩增后,就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端).在接下来的扩增中每个产物就都会有了.PCR的时
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最佳答案:这个距离隔得算是还可以啊,一般一个酶的作用位点才4-6个碱基,1000个碱基还相互干扰的比较少.如果特别担心,可以换成两次单酶切,先切A,稍微过下柱子,再切B,
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最佳答案:没什么特别的,在酶切位点前或后加2-3bp碱基就可以,只是注意保持引物设计的原则,以及不能产生新的酶切位点