博凌科为生物科技-为你用多聚赖氨酸包被可以减少细胞脱片,根据细胞类型而定,最好用之.以下是我作细胞爬片时步骤:(1)多聚赖氨酸(PLL):武汉博士德分装Sigma产品,10ml/瓶.4度存 放,有效期1年.博士德说明书明确指出:多聚赖氨酸一般用干净的塑料器皿,如塑料切片盒,塑料杯等稀释,而不能用玻璃 器皿稀释,以免影响效果;在1:10稀释液可以保存在4度里,三个月内仍然可以使用.因为多聚赖氨酸对细胞有一定毒性,所以在保证贴附的前提下,尽量使用低点儿的浓 度.(2)无菌处理:PLL不可以高温消毒,故应过滤除均,分装于无菌处理的细胞冻存管内,1ml/管,封口模密封,4度保存.另外,准备无菌去离子水 50ml.(3)配置工作液:用移液枪吸取0.3ml PLL+3ml 无菌去离子水,混匀放于10ml无菌塑料离心管中.封口模密封后4度存放.(4)玻片处理:常规处理的盖玻片,纱布夹心饼式消毒、保存.铺片于培养皿中,移液枪将PLL工作液滴加于玻片上,室温10分钟后,用消毒 好的纱布条吸取玻片上的PLL液.在超静台内风干后使用,或者超静台内过夜晾干,次日使用.(5)常规细胞消化,离心后爬片.如果既然细胞生长状态良好,染色时不掉片,可以不用PLL.有些细胞,如神经元就必须要PLL包,要不细胞生长受影响,也会掉片.
求细胞爬片时用多聚赖氨酸包被的步骤
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