解题思路：基因分离定律的实质：在杂合子的细胞中，位于一对同源染色体上的等位基因，具有一定的独立性；生物体在进行减数分裂形成配子时，等位基因会随着同源染色体的分开而分离，分别进入到两个配子中，独立地随配子遗传给后代．据此答题．
A、F2表现型的比例为3：1是性状分离比，不是说明基因分离定律实质，A错误；
B、F1产生配子的比例为1：1，说明减数分裂时等位基因随同源染色体的分开而分离，产生不同配子的比例为1：1，因而最能说明基因分离定律实质，B正确；
C、F2基因型的比例为1：2：1只能体现子二代的基因型种类及比例，不能说明基因分离定律实质，C错误；
D、测交后代表现型的比例为1：1是性状分离比，说明F1产生配子的比例为1：1，D错误．
故选：B．
点评：
本题考点： 基因的分离规律的实质及应用．
考点点评： 本题考查测交方法检验F1的基因型、对分离现象的解释和验证，要求考生识记测交的概念，掌握测交的意义及基因分离定律的实质，明确测交后代显隐性之比最能体现基因分离定律的实质，属于考纲理解层次的考查．